小鼠小膠質(zhì)BV2是從小鼠腦小膠質(zhì)瘤中收集的，干冰運(yùn)輸并轉(zhuǎn)移到液氮或-80度冰箱冷凍或收到后立即直接回收；存活的細(xì)胞在接收后應(yīng)繼續(xù)生長(zhǎng)，當(dāng)傳代達(dá)到良好的細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)時(shí)再進(jìn)行冷凍。收到后，請(qǐng)檢查是否有漏液。先在顯微鏡下確認(rèn)細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)，用酒精對(duì)瓶壁進(jìn)行消毒，將T25瓶在37℃培養(yǎng)2-3H左右。
 

　　離心后，除去上清液，加入6ml新的*培養(yǎng)基，重新加入原T25培養(yǎng)瓶。如果細(xì)胞長(zhǎng)到90%，請(qǐng)及時(shí)進(jìn)行細(xì)胞傳代，傳代應(yīng)使用完整培養(yǎng)基。半貼壁細(xì)胞會(huì)黏附在瓶底，但黏附不緊密。輕輕吸取培養(yǎng)基，輕輕吹打細(xì)胞表面，細(xì)胞表面不經(jīng)胰蛋白酶消化即脫落。推薦使用培養(yǎng)皿進(jìn)行培養(yǎng)，更適合吹細(xì)胞。
 

　　吹細(xì)胞時(shí)盡量輕柔，不要產(chǎn)生過多氣泡，以免影響細(xì)胞狀態(tài)。下面是小鼠小膠質(zhì)BV2使用小tips，希望對(duì)你的使用會(huì)有所幫助。
 

　　1、小鼠小膠質(zhì)BV2呈半貼壁圓形或多角形，有的呈圓形懸浮狀。它們可以在傳代過程中收集和培養(yǎng)。更換溶液時(shí)，將懸浮的細(xì)胞離心收集，然后重新連接到原瓶中。如果貼壁細(xì)胞多，活性好，可以不用懸浮細(xì)胞；

　　2、細(xì)胞對(duì)胰蛋白酶敏感。胰蛋白酶消化后，細(xì)胞形狀會(huì)更加紡錘形并變得緊密，不建議通過胰蛋白酶消化；

　　3、細(xì)胞生長(zhǎng)快，培養(yǎng)基消耗快。在培養(yǎng)過程中密切注意細(xì)胞狀態(tài)。當(dāng)密度高，培養(yǎng)液趨于變黃時(shí)，及時(shí)更換溶液，避免細(xì)胞狀態(tài)變差；

　　4、小鼠小膠質(zhì)BV2細(xì)胞冷凍后，取出上清，用PBS洗滌，然后加入1ml胰蛋白酶。待細(xì)胞變圓脫落后，加入1ml培養(yǎng)基終止消化，用血細(xì)胞計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)；

　　5、4min1000rpm離心去除上清液。加入1ml血清重懸細(xì)胞，根據(jù)細(xì)胞數(shù)加入血清和DMSO，輕輕混勻。DMSO終濃度為10%，細(xì)胞密度為1-2xe6/ml。每個(gè)冷凍保存管用1ml細(xì)胞懸液冷凍，注意凍存管的鑒別；

　　6、將凍存管放入程序冷卻箱內(nèi)，放入-80℃冰箱，至少2小時(shí)后轉(zhuǎn)入液氮沖洗保存。記錄低溫恒溫器的位置以備下次檢索。